一、标志物介绍

1988年，日本学者Tetuji Sudoh首次从猪脑内分离得到一种具有强力的利钠、利尿、扩血管和降压作用的多肽，命名为脑钠肽或称钠尿肽(brin.natriuretic peptide,BNP)^[1]。以后的研究表明，包括BNP在内的-组多肽在生物进化的过程中逐渐发展产生ANP、BNP、CNP、DNP、VNP和Urodilatin 等)，称为利钠肽(NP)家族。其功能是维持循环系统的容量、渗透压和压力调节的稳态。BNP主要存在于心室隔膜颗粒中，其分泌有赖于心室的容积扩张和压力负荷增加。

N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)和BNP同属利钠肽家族，均用于临床检测。虽然两者有相同的生物学来源，但生物学效应和临床意义不完全相同。心肌细胞受刺激，产生含134个氨基酸的B型利钠肽原前体(pre-proBNP)，随后形成含108个氨基酸的BNP前体(proBNP)，后者在内切酶的作用下裂解为含有76个氨基酸、无生物活性的NT-proBNP和含有32个氨基酸、有活性的B型利钠肽(BNP)。BNP的清除主要通过与BNP清除受体结合，而NT-proBNP则主要由肾小球滤过，因此，其血浓度受肾功能影响大于BNP。 BNP半衰期短(22min)，体外稳定性差，而NT-proBNP半衰期较长(120 min),体外稳定性强，在心力衰竭患者中的浓度较BNP高，在有些情况下更有利于心力衰竭的诊断。在应用基因重组技术产生的重组人B型利钠肽(rhBNP)进行治疗时，测定NT-proBNP不受干扰^[2]。

二、临床诊断意义

作为心功能紊乱最敏感和最特异的指标，利钠肽具有重要的临床意义，在国内，《中国心力衰竭诊断和治疗指南2018》中指出，作为心衰生物学标志物：1、利钠肽可用于因呼吸困难而疑为心衰患者的诊断和鉴别诊断，BNP <35 ng/L，NT-proBNP <125 ng/L时不支持慢性心衰诊断，其诊断敏感性和特异性低于急性心衰时。利钠肽可用来评估慢性心衰的严重程度和预后(I类，A级)。2、有助于急性心衰诊断和鉴别诊断(Ⅰ类,A级) ：BNP<100ng/L、NT-proBNP < 300 ng/L为排除急性心衰的切点。应注意测定值与年龄、性别和体重等有关，老龄、女性、肾功能不全时升高，肥胖者降低。诊断急性心衰时NT-proBNP水平应根据年龄和肾功能不全分层︰50岁以下的成人血浆NT-proBNP浓度>450 ng/L，50岁以上血浆浓度> 900 ng/L ，75岁以上应>1800 ng/L ，肾功能不全(肾小球滤过率<60ml/min )时应>1 200 ng/L。(2)有助于评估严重程度和预后(Ⅰ类，A级）：NT-proBNP > 5 000 ng/L提示心衰患者短期死亡风险较高；>1 000 ng/L提示长期死亡风险较高。3、利钠肽监测和指导治疗:急性心衰患者治疗后较基线值降幅≥30% ，提示治疗可能有效。病情已稳定的患者，如利钠肽仍然明显增高，应继续随访和加强治疗。应指出的是，不应单纯依靠利钠肽,临床评估还是主要的，根据病情作出综合性评价最为重要[3]。

三、博岳生物利钠肽抗体

3.1 配对抗体推荐

针对利钠肽检测，博岳生物推出如下几种NT-proBNP单克隆抗体和BNP单克隆抗体，另外还提供对应的NT-proBNP重组抗原和BNP重组抗原。

表1  用于利钠肽双抗夹心免疫检测系统开发的配对推荐

3.2 NT-proBNP抗体性能分析

以化学发光平台为例，博岳内部实验室挑选了一对NT-proBNP单克隆抗体进行试剂性能分析，其中捕获抗体选择NT-proBNP101，标记抗体选择NT-proBNP103。结果显示该配对原料在化学发光平台上表现良好，其中低值端精密度≤5%，线性范围为10-30000pg/ml，最低检出限LOB为5pg/ml，77例的临床样本比对显示与罗氏试剂盒（cobas 411）之间存在良好的相关性。

（1）精密度测试

取4例低值临床样本，使用自研试剂盒测试10次，分析显示低值端精密度良好 （CV≤5%）。结果见图1。

图1 NT-proBNP精密度测试

（2）线性范围

见图2。取1例高值临床样本，由Roche试剂盒（cobas 411）测试确定浓度后，按比例连续稀释成一系列梯度测试，对样本理论浓度和测试浓度做回归分析，分析显示，在10-30000pg/ml范围内，线性相关系数R²＞0.99。见图2。

图2 NT-proBNP线性范围

（3）与罗氏试剂相关性

取77例临床样本，分别使用自研试剂盒和Roche试剂盒（cobas 411）测试，对两试剂盒测试浓度做线性回归分析，分析显示两试剂呈显著相关（R²=0.9968）。见图3。

图3 NT-proBNP临床比对结果（N=77）

（4）低值端样本与罗氏试剂的一致性

取23例低值端临床样本，使用Roche试剂盒（cobas 411）和自研试剂盒平行检测，对两试剂盒测试浓度做线性回归分析，分析显示两试剂呈显著相关（ R²=0.9934）。见图4。

图4   NT-proBNP低值样本（＜1500pg/ml）一致性对比（N=23）

（5）NT-proBNP试剂灵敏度

按EP17-A文件测试自研试剂灵敏度LOB=5pg/ml，LOD=8pg/ml，LOQ=13pg/ml。

图5  NT-proBNP试剂灵敏度

参考文献：

[1] Mukoyama M, Nakao K,Saito Y,et al. Human brain natriuretic peptide, a novel cardiac hormone. Lancet, 1990,，335: 801-802.

[2] NT-proBNP临床应用中国专家共识.中国心血管病研究2011年6月第9卷第6期：401-408.

[3] 中国心力衰竭诊断和治疗指南2018.